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Abcam Anti-PSMA antibody售后流程

更新時間:2024-07-26      點(diǎn)擊次數(shù):757

1. 產(chǎn)品照片 (包括管壁的批次號、管底的二維碼的清晰照片)
Abcam Anti-PSMA antibody售后流程
2. 請?zhí)峁┠膶?shí)驗(yàn)結(jié)果并描述出現(xiàn)的問題

注意:

· 請在結(jié)果圖片中標(biāo)注準(zhǔn)確的蛋白marker位置和大小,并標(biāo)注每個泳道的樣品信息;

· 請附上內(nèi)參蛋白的檢測結(jié)果;

· 請用文字語言準(zhǔn)確地描述實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的問題。
Abcam Anti-PSMA antibody售后流程
目標(biāo)蛋白出現(xiàn)了兩至三條蛋白條帶,且MDA-MB-231細(xì)胞中有表達(dá)psma蛋白,但pc3細(xì)胞應(yīng)該低表達(dá)甚至不表達(dá)psma蛋白,卻出現(xiàn)了假陽。

3. 產(chǎn)品儲存 (溫度和分裝)

· 儲存溫度: -20攝氏度

· 是否進(jìn)行分裝及分裝后每管的體積: 未進(jìn)行分裝

4. 檢測的樣品

· 樣品種屬信息(Human/Mouse/Rat etc.):Human

· 如果檢測樣品為細(xì)胞系,請?zhí)峁┘?xì)胞系名稱:mda-mb-231細(xì)胞,pc3細(xì)胞

· 如果檢測樣品為組織,請?zhí)峁┙M織名稱:

· 是全細(xì)胞裂解液還是某一亞細(xì)胞組分裂解液:全細(xì)胞裂解液

5. 裂解液

· 上樣的蛋白總量(μg/lane): 10-15μg

· 裂解緩沖液類型: RIPA裂解液

· 蛋白酶抑制劑:磷酸酶抑制劑混合物,蛋白酶抑制劑混合物

上樣緩沖液成分:
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· 煮樣溫度和時間:100攝氏度,10min

6. 電泳和轉(zhuǎn)膜

電泳 :

· 使用變性膠(SDS-PAGE)還是native膠(native-PAGE):SDS-PAGE

· 分離膠濃度:8%

轉(zhuǎn)膜:

· 轉(zhuǎn)膜方法(濕轉(zhuǎn)/半干轉(zhuǎn) etc.):濕法

· 轉(zhuǎn)膜電流/電壓和轉(zhuǎn)膜時間:300mA,2h

· 是否用麗春紅染色檢查過轉(zhuǎn)膜效率?若有,請?zhí)峁?shí)驗(yàn)圖片:否

7.  封閉條件

· 封閉劑成分(脫脂牛奶/BSA etc.)和濃度:5%脫脂牛奶

· 封閉時間和溫度:室溫,2h

8.  一抗

· 一抗稀釋比例:1:1000

· 抗體稀釋液:TBST

· 孵育時間和溫度:4攝氏度,10-12h

· 洗液成分(請注明Tween的含量):TBST, 每1LTBS(1X)加入500μl Tween20

· 洗膜具體步驟:每次10min,洗3次

9.  二抗

· 產(chǎn)品名稱:Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)HRP

· 品牌與貨號:南京翼飛雪生物科技有限公司  YFSA02

· 二抗稀釋比例:1:5000

· 孵育時間和溫度:室溫,2h

· 洗液成分(請注明Tween的含量):TBST, 每1LTBS(1X)加入500μl Tween20

· 洗膜具體步驟:每次10min,洗3次

· 是否與其它一抗搭配使用沒有問題? 如果是, 請?zhí)峁┫嚓P(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與其它一抗搭配使用沒有問題


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10. 檢測

· ECL/ECL+/其它檢測方法-請說明:ECL

11. 是否使用陽性對照與陰性對照? 如果是,請?zhí)峁┫嚓P(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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12. 請確認(rèn)靶標(biāo)蛋白在所檢測樣本中的表達(dá)情況,并提供相關(guān)參考文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)庫信息。

The Potential of PSMA as a Vascular Target in TNBC.

13. 是否用過其它同指標(biāo)產(chǎn)品? 如果是,請?zhí)峁┢放?、貨號與實(shí)驗(yàn)結(jié)果。



14. 優(yōu)化步驟

· 您使用該投訴產(chǎn)品進(jìn)行過幾次WB:兩次

· 是否每次都遇到相同問題(例如每次背景條帶都在相同位置):是的

· 您已經(jīng)優(yōu)化過哪些步驟:延長封閉時間

廠家郵件回復(fù):

1. 建議嘗試更換封閉液,比如用5%BSA進(jìn)行封閉:

2. 建議做一個不孵一抗、只二抗的陰性對照,檢測二抗與樣本是否存在非特異性結(jié)合

客戶重新按照廠家的建議做的結(jié)果基本符合實(shí)驗(yàn)要求,售后處理結(jié)束。



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